რა არის ddNTP-ების გამოყენების მიზანი?
რა არის ddNTP-ების გამოყენების მიზანი?

ვიდეო: რა არის ddNTP-ების გამოყენების მიზანი?

ვიდეო: რა არის ddNTP-ების გამოყენების მიზანი?
ვიდეო: Sanger sequencing 2024, ნოემბერი
Anonim

DdNTP ეხება დიდოქსინუკლეოტიდები ტრიფოსფატები, რომლებიც გამოიყენება Sanger-ის დიდოქსი მეთოდით დნმ-ის სხვადასხვა სიგრძის ჯაჭვების წარმოებისთვის დნმ-ის თანმიმდევრობისთვის. ეს იწვევს დნმ-ის პოლიმერიზაციის (ან დნმ-ის გახანგრძლივების) პროცესის შეწყვეტას, რადგან ამ პროცესს სჭირდება 3'-OH ჯგუფი გასაგრძელებლად.

აქედან გამომდინარე, რატომ გამოიყენება ddNTP-ები თანმიმდევრობაში?

დიდოქსინუკლეოტიდები არიან დნმ პოლიმერაზას ჯაჭვის გახანგრძლივებული ინჰიბიტორები, გამოყენებული სანგერის მეთოდში დნმ-ისთვის თანმიმდევრობა რა დიდოქსირიბონუკლეოტიდებს არ აქვთ 3' ჰიდროქსილის ჯგუფი, ამიტომ ჯაჭვის შემდგომი გახანგრძლივება არ შეიძლება მოხდეს მას შემდეგ, რაც ეს დიდოქსინუკლეოტიდი იქნება ჯაჭვზე. ამან შეიძლება გამოიწვიოს დნმ-ის შეწყვეტა თანმიმდევრობა.

ანალოგიურად, ddNTP-ები ერთვის dNTP-ებს? ერთი ან მეტი dNTP-ები ისინი რადიოაქტიურად ეტიკეტირებულია, რათა ხელი შეუწყოს რეპლიკაციის პროდუქტების ვიზუალიზაციას. და ბოლოს, თითოეული მილი იღებს ოთხიდან ერთ-ერთ სპეციალურ ნუკლეოტიდს, რომელსაც ეწოდება დიდოქსინუკლეოტიდები ( ddNTPs ). თუმცა, დნმ პოლიმერაზას შეყვანის შემდეგ ჯაჭვის შემდგომი გაფართოება არ შეუძლია, რადგან მას სჭირდება 3'-OH. მიმაგრება შემდეგ ნუკლეოტიდამდე.

ანალოგიურად შეიძლება იკითხოთ, როგორ აჩერებენ ddNTP-ები თანმიმდევრობის რეაქციას?

როდესაც არის მცირე რაოდენობით თანმიმდევრობის რეაქციები , დიდოქსირიბონუკლეოზიდის ტრიფოსფატები ( ddNTPs ) შეწყვიტოს თანმიმდევრობის რეაქცია მზარდი დნმ-ის ჯაჭვებში სხვადასხვა პოზიციებზე. ddNTP აჩერებს თანმიმდევრობის რეაქციას რადგან ისინი: იწვევენ დნმ პოლიმერაზას თარგის ძაფიდან ჩამოვარდნას. გ.

რა ტექნიკა შეიძლება გამოყენებულ იქნას დიდოქსინუკლეოტიდებთან?

სანჯერის თანმიმდევრობა არის ა მეთოდი დნმ-ის თანმიმდევრობა, რომელიც დაფუძნებულია ჯაჭვის შეწყვეტის შერჩევითი ინკორპორაციის საფუძველზე დიდოქსინუკლეოტიდები დნმ პოლიმერაზას მიერ ინ ვიტრო დნმ-ის რეპლიკაციის დროს. შემუშავებული ფრედერიკ სანჯერისა და კოლეგების მიერ 1977 წელს, იყო ყველაზე ფართოდ გამოყენებული თანმიმდევრობა მეთოდი დაახლოებით 40 წლის განმავლობაში.

გირჩევთ: