როგორ მუშაობს გიბსონის კლონირება?

2024 ავტორი: Stanley Ellington | [email protected]. ბოლოს შეცვლილი: 2023-12-16 00:19

The გიბსონის კლონირება Master Mix შედგება სამი განსხვავებული ფერმენტისგან ერთ ბუფერში. თითოეულ ფერმენტს აქვს სპეციფიკური და უნიკალური ფუნქცია რეაქციისთვის: T5 ეგზონუკლეაზა - ქმნის ერთჯაჭვიანი დნმ-ის 3' გადახურვას დნმ-ის 5' ბოლოდან უკან ღეჭვით. დამატებითი დნმ-ის ფრაგმენტები შემდგომში შეიძლება შეერთონ ერთმანეთს.

ამის გათვალისწინებით, როგორ მუშაობს გიბსონი?

The გიბსონი ასამბლეის მეთოდი არის კლონირების პროცედურა, რომელიც საშუალებას იძლევა ორი ან მეტი ფრაგმენტის კლონირება შემაკავებელი ფერმენტის მონელების ან თავსებადი შეზღუდვის ადგილების გარეშე. ამის ნაცვლად, მომხმარებლის მიერ განსაზღვრული გადახურვის ბოლოები ჩართულია ფრაგმენტებში, რათა მოხდეს მიმდებარე ფრაგმენტების უწყვეტი შეერთება.

ანალოგიურად, რა არის Gibson Assembly Master Mix-ში? The Gibson Cloning Master Mix შედგება სამი სხვადასხვა ფერმენტისგან ერთ ბუფერში. თითოეულ ფერმენტს აქვს სპეციფიკური და უნიკალური ფუნქცია რეაქციისთვის: T5 ეგზონუკლეაზა - ქმნის ერთჯაჭვიანი დნმ-ის 3' გადახურვას დნმ-ის 5' ბოლოდან უკან ღეჭვით. დამატებითი დნმ-ის ფრაგმენტები შემდგომში შეიძლება შეაერთონ ერთმანეთს.

ამ გზით, როგორ მუშაობს Golden Gate-ის ასამბლეა?

ოქროს კარიბჭე კლონირება ან ოქროს კარიბჭის ასამბლეა არის მოლეკულური კლონირების მეთოდი, რომელიც მკვლევარს საშუალებას აძლევს ერთდროულად და მიმართულებით შეაგროვოს დნმ-ის მრავალი ფრაგმენტი ერთ ნაწილად IIs ტიპის შეზღუდვის ფერმენტების და T4 დნმ ლიგაზას გამოყენებით. ეს შეკრება არის შესრულებულია ინ ვიტრო.

როგორ მუშაობს Gateway კლონირება?

The GATEWAY კლონირება ტექნოლოგია დაფუძნებულია უბნის სპეციფიკურ რეკომბინაციის სისტემაზე, რომელსაც იყენებს ფაგი l მისი დნმ-ის E-ში ინტეგრირებისთვის. ჩასმული ფაგის დნმ-ის მიმდებარე attL და attR ადგილები რეკომბინირებულია სპეციალურად ადგილზე ექსციზიის მოვლენის დროს, რათა მოხდეს attP ადგილის რეფორმირება ფაგში l და attB საიტი E.