რატომ არის საჭირო PCR პროდუქტების გასუფთავება თანმიმდევრობამდე?

2024 ავტორი: Stanley Ellington | [email protected]. ბოლოს შეცვლილი: 2023-12-16 00:19

სასურველის გადამოწმება პროდუქტი არის არსებითი , რომელიც მოიცავს არასპეციფიკური არარსებობის დადასტურებას პროდუქტები და პრაიმერის დიმერები. სუფთა რეაქციის ნარევის ზევით ასევე საჭირო არაინკორპორირებული პრაიმერებისა და dNTP-ების მოსაშორებლად, რომლებმაც შეიძლება ხელი შეუშალონ შემდგომ რეაქციებს და გამოიწვიოს წაუკითხავი თანმიმდევრობა.

გარდა ამისა, რატომ არის საჭირო PCR პროდუქტების გაწმენდა?

Შენ უნდა PCR პროდუქტების გაწმენდა გამოუყენებელი პრაიმერების, ნუკლეოტიდების და ფერმენტების მოშორება ლიგაციის წარმატების ოპტიმიზაციის მიზნით, რომელიც შეინარჩუნებს და თანმიმდევრობას პროდუქტი დან PCR . რომ განწმენდა The PCR პროდუქტები , გამოიყენება ზომის გამორიცხვის ქრომატოგრაფია.

შეიძლება ასევე იკითხოთ, უნდა გაიწმინდოთ თუ არა PCR პროდუქტები შეზღუდულ ენდონუკლეაზას მონელებამდე? Უმრავლესობა შეზღუდვა ფერმენტები აქტიურია PCR ბუფერები. კლონირების აპლიკაციებისთვის, განწმენდა დან PCR პროდუქტები მონელებამდე არის საჭირო ამოიღონ აქტიური თერმოფილური დნმ პოლიმერაზა, რომელიც იმყოფება მასში PCR ნარევი. დნმ პოლიმერაზებმა შეიძლება შეცვალონ გახლეჩილი დნმ-ის ბოლოები და შეამცირონ ლიგაციის გამომუშავება.

ხალხი ასევე იკითხავს, როგორ ამზადებთ PCR პროდუქტებს თანმიმდევრობისთვის?

PCR პროდუქტების პირდაპირი თანმიმდევრობა

1. დარწმუნდით, რომ გააძლიერეთ სწორი ფრაგმენტი.
2. თქვენ უნდა ამოიღოთ ყველა ნარჩენი PCR პრაიმერი და არაინკორპორირებული ნუკლეოტიდები.
3. თუ PCR პრაიმერები ასევე იქნება თანმიმდევრობის პრაიმერი(ები), დარწმუნდით, რომ ისინი ემთხვევა ჩვენს პირობებს.
4. ნუ აჭარბებთ ნიმუშს!

შეგიძლიათ PCR პროდუქტის თანმიმდევრობა?

პირდაპირი თანმიმდევრობა დან PCR პროდუქტები . თანმიმდევრობა იყენებს მხოლოდ ერთი პრაიმერი გამოყენებული ორის ნაცვლად PCR . Თუ შენ გააკეთებ არ ამოიღოთ ორივე პრაიმერი, შენ იზავ მიიღეთ ორი თანმიმდევრობები ერთმანეთზე გადახურული, რომლებიც არ იკითხება. კარგია ა PCR პრაიმერი ამისთვის თანმიმდევრობა რამდენადაც ის შეესაბამება ჩვენს პირობებს.