რატომ არ ჭრის შეზღუდვის ფერმენტი?
რატომ არ ჭრის შეზღუდვის ფერმენტი?

ვიდეო: რატომ არ ჭრის შეზღუდვის ფერმენტი?

ვიდეო: რატომ არ ჭრის შეზღუდვის ფერმენტი?
ვიდეო: Why is My Restriction Enzyme Not Cutting DNA? 2024, ნოემბერი
Anonim

შეიძლება რამდენიმე განსხვავებული მიზეზი იყოს თქვენი შეზღუდვის ფერმენტი არ ჭრის დნმ, რომელიც განხილულია ამ ვიდეოში. მოსახსნელი დნმ-ის მომზადება უნდა არ იყოს დამაბინძურებლებისგან, როგორიცაა ფენოლი, ქლოროფორმი, ალკოჰოლი, EDTA, სარეცხი საშუალებები ან ჭარბი მარილები, რაც ხელს უშლის შეზღუდვის ფერმენტი აქტივობა.

ამასთან დაკავშირებით, რატომ არ ჭრიან რესტრიქციული ფერმენტები ბაქტერიულ დნმ-ს?

ბაქტერიები აქვს შეზღუდვის ფერმენტები , ასევე ე.წ შეზღუდვის ენდონუკლეაზები , რომელიც გაჭრა ორჯაჭვიანი დნმ კონკრეტულ წერტილებში ფრაგმენტებად. საინტერესოა, შეზღუდვის ფერმენტები არ დაშორდეთ საკუთარ თავს დნმ . ბაქტერიები თავიდან აიცილონ საკუთარი დნმ საწყისი chop ქვემოთ მიერ შეზღუდვის ფერმენტი მეთილაციის გზით შეზღუდვა საიტები.

შეიძლება ასევე იკითხოთ, სად ჭრიან რესტრიქციული ფერმენტები? შეზღუდვის ფერმენტი ტიპები ზოგადად, ტიპი I ფერმენტები დაჭრილი დნმ ამოცნობის თანმიმდევრობისგან დაშორებულ ადგილებში; ტიპი II გაჭრა დნმ ამოცნობის თანმიმდევრობის შიგნით ან ახლოს; ტიპი III გაჭრა დნმ ამომცნობი თანმიმდევრობების მახლობლად; და ტიპი IV არღვევს მეთილირებულ დნმ-ს.

ანალოგიურად, ისმება კითხვა, რა მოხდება, თუ ძალიან ბევრ შემაკავებელ ფერმენტს დაამატებთ?

შეიძლება მოხდეს არასრული მონელება როდესაც ძალიან ბევრი ან ძალიან პატარა ფერმენტი გამოიყენება. The დამაბინძურებლების არსებობა The დნმ ნიმუში შეუძლია დათრგუნავს ფერმენტები , ასევე იწვევს არასრულ მონელებას. Ზოგიერთი შეზღუდვის ფერმენტები მოითხოვს კოფაქტორებს სრული აქტივობისთვის.

რატომ არ მუშაობს ჩემი შეზღუდვის დაიჯესტი?

არასრული თუ არა საჭმლის მონელება დნმ-ის მეთილაციით დაბლოკილი ფერმენტის აქტივობის გამო. თუ თქვენი ფერმენტი აქტიურია და ინელებს კონტროლი დნმ და The რეაქცია იქმნება ოპტიმალური პირობების გამოყენებით, მაგრამ თქვენ მაინც ხედავთ საკითხები თან საჭმლის მონელება , შეიძლება იმიტომ The ფერმენტი ინჰიბირებულია მეთილირებით The შაბლონი დნმ.

გირჩევთ: