რატომ გამოიყენება გლუკოზა პლაზმური დნმ-ის იზოლაციაში?

2024 ავტორი: Stanley Ellington | [email protected]. ბოლოს შეცვლილი: 2023-12-16 00:19

ამ ნაბიჯის მიზანია უჯრედების საწყისი მოცულობის გაზრდა ისე, რომ მეტი პლაზმიდური დნმ შეიძლება იზოლირებული იყოს მოსამზადებლად. გლუკოზა ემატება უჯრედების გარეთ ოსმოსური წნევის გასაზრდელად. ტრისი არის ბუფერული აგენტი გამოყენებული მუდმივი pH-ის შესანარჩუნებლად (= 8.0).

ანალოგიურად, რა როლი აქვს გლუკოზას დნმ-ის ექსტრაქციაში?

50 მმ (მილიმოლარი) გლუკოზის შაქარი ემატება GTE ბუფერს ოსმოლარობის შესანარჩუნებლად, სადაც უჯრედების გარეთ გამხსნელი ნივთიერების კონცენტრაცია ახლოსაა უჯრედების შიგნით. ეს ხელს უშლის უჯრედების ნაადრევ ლიზისს, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს დაქვეითება დნმ შემოსავალი აგრეგაციისა და დეგრადაციის გამო.

გარდა ამისა, რატომ გამოიყენება NaOH დნმ-ის ექსტრაქციაში? In დნმ-ის იზოლაცია ან მოპოვება , NaOH ( ნატრიუმის ჰიდროქსიდი ) არის გამოყენებული როგორც ტუტე ლიზისის ბუფერი. ის ძირითადად ხელს უწყობს უჯრედის მემბრანის დაშლას ისე, რომ უჯრედის შიდა კომპონენტები, მათ შორის დნმ გამოდი.

აქედან გამომდინარე, რა არის პლაზმური დნმ-ის იზოლაციის მიზანი?

პლაზმიდის იზოლაცია რა ის იზოლაცია დან პლაზმიდური დნმ ბაქტერიებისგან არის გადამწყვეტი ტექნიკა მოლეკულურ ბიოლოგიაში და არის არსებითი ნაბიჯი ბევრ პროცედურაში, როგორიცაა კლონირება, დნმ თანმიმდევრობა, ტრანსფექცია და გენური თერაპია. ეს მანიპულაციები მოითხოვს იზოლაცია მაღალი სისუფთავის პლაზმიდური დნმ.

როგორ ხდება პლაზმური დნმ-ის იზოლირება E coli-დან?

ის იზოლაცია დან პლაზმიდური დნმ E . coli ტუტე ლიზისის გამოყენება კარგად დამკვიდრებული მეთოდია. ე . coli თან პლაზმიდი კულტივირებულია მედიაში ანტიბიოტიკებთან ერთად უჯრედის მაღალი სიმკვრივემდე, აღებულია და შემდეგ ლიზდება SDS/NaOH ხსნარით.